這樣做,會大大減少IHC背景信號

來源: Cell Signaling Technology (CST)   2020-4-16   訪問量:1183評論(0)

當對小鼠樣本進行 IHC 實驗時,CST 更推薦您使用兔單克隆抗體而不是鼠單克隆抗體,為什么,這么做有什么好處?3 步讓您了解原因!


使用小鼠單克隆抗體會造成小鼠組織結果無法解讀

如經適當驗證,小鼠單克隆抗體會特異性地對目的靶標染色,但數據解讀很可能因使用抗小鼠 IgG 檢測試劑(二抗)同時能檢測內源性小鼠 IgG 而受到影響。如圖1,依次使用一種 α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)小鼠單克隆抗體和一種抗小鼠 IgG 檢測試劑對石蠟包埋的小鼠肺細胞進行免疫組織化學 (IHC) 分析,結果顯示出預期的特異性染色,但由于存在抗小鼠 IgG 二抗,還顯示出背景染色過度。避免小鼠 IgG 背景的唯一辦法是在你的實驗步驟中添加費力的步驟,或換用一種非嚙齒類抗體,例如聯合使用兔單克隆抗體和抗兔 IgG 的二抗。

圖1 ,注:小鼠 IgG 二抗導致背景染色過度。

 

抗小鼠 IgG 二抗會造成小鼠抗小鼠背景染色

使用小鼠一抗需要抗小鼠 IgG 二抗或檢測試劑,這同時會對一抗和小鼠組織樣品的 IgG 蛋白進行染色。為了讓您直觀地觀察,圖2展示的是在沒有一抗的情況下,使用 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse) #8125 對石蠟包埋的小鼠肺細胞進行 IHC 分析。

 

圖2 ,注:小鼠 IgG 二抗導致背景染色過度。


 

兔單克隆抗體無需額外的實驗步驟即可產生可解讀的小鼠組織結果

使用在小鼠組織中經 IHC 驗證的兔單克隆一抗可克服小鼠抗小鼠染色,并發現明確且可解讀的結果。圖3 所示的是使用 α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb #19245 對石蠟包埋的小鼠肺細胞進行的 IHC 分析。

 

圖3,注:使用兔單克隆抗體和抗兔IgG檢測即可避免背景過度染色。


若您正在使用來自CST的可用于IHC實驗的兔單克隆抗體進行實驗,不用擔心背景染色過度的問題。

在小鼠組織中進行過 IHC 驗證的部分兔單克隆抗體

 

產品名稱

貨號

應用

反應性

細胞生物學

Bax (D3R2M) Rabbit mAb (Rodent Preferred)

14796

WB、IP、IHC-P

M、R

N-Cadherin (D4R1H) XP® Rabbit mAb

13116

WB、IP、IHC-P、IF-IC

H、M

CD44 (E7K2Y) XP® Rabbit mAb

37259

WB、IHC-P

H、M、R

EGF Receptor (D1P9C) Rabbit mAb (Mouse Preferred)

71655

WB、IP、IHC-P、 IF-F、IF-IC、F

M

EpCAM (E6V8Y) XP® Rabbit mAb (Mouse Preferred)

93790

WB、IP、IHC-P

H、M、R

HER3/ErbB3 (D22C5) XP® Rabbit mAb

12708

WB、IP、IHC-P、 IF-IC、F

H、M、(R)

Integrin ß3 (D7X3P) XP® Rabbit mAb

13166

WB、IHC-P

H、M

Keratin 5 (E2T4B) XP® Rabbit mAb (IHC Preferred)

71536

IHC-P

H、M

Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb (Mouse Preferred; IHC Formulated)

12202

IHC-P

M

Olfm4 (D6Y5A) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

39141

WB、IP、IHC-P、IF-F

M

Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb (Rodent Specific)

94885

WB、IP、IHC-P、 IF-IC、F

M、R

PCNA (D3H8P) XP® Rabbit mAb

13110

WB、IP、IHC-P、IF-F、 IF-IC、F

H、M、R、Mk

Perforin (E3W4I) Rabbit mAb

31647

WB、IHC-P

M

α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb

19245

WB、IP、IHC-P、IF-F

H、M、R

Vinculin (E1E9V) XP® Rabbit mAb

13901

WB、IHC-P、F

H、M、R、Mk

發育生物學

Non-phospho (Active) β-Catenin (Ser45) (D2U8Y) XP® Rabbit mAb

19807

WB、IP、IHC-P、IF-F、 IF-IC、F

H、M、R、Mk、 Z、Dg

HES1 (D6P2U) Rabbit mAb

11988

WB、IP、IHC-P

H、M、R、Mk

SMAD4 (D3R4N) XP® Rabbit mAb

46535

WB、IP、HC-P、IF-IC、 F、ChIP、ChIP-seq

H、M、R、Mk

Sox9 (D8G8H) Rabbit mAb

82630

WB、IHC-P、IF-IC、F

H、M、(M、R)

YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb

14074

WB、IP、HC-P、IF-IC、 F、ChIP、ChIP-seq

H、M、R、Hm、 Mk、(B、Hr)

表觀遺傳學

ARID1A/BAF250A (D2A8U) Rabbit mAb

12354

WB、IHC-P、ChIP

H、M、R、Mk

EED (E4L6E) XP® Rabbit mAb

85322

WB、IP、IHC-P、IF-IC、 F、ChIP

H、M、R、Mk

Glucocorticoid Receptor (D6H2L) XP® Rabbit mAb

12041

WB、IP、HC-P、IF-IC、 F、ChIP、ChIP-seq

H、M、R、Mk

代謝

Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb

50081

WB、IP、IHC-P

H、M、R、C、Z、 B、Pg)

Arginase-1 (D4E3MTM ) XP® Rabbit mAb

93668

WB、IHC-P、IF-F、 IF-IC、F

H、M、R

COX IV (D6I4K) Rabbit mAb (Rodent Specific)

38563

WB、IP、IHC-P

M、R

SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific)

23214

WB、IP、IHC-P、IF-IC

M、R

神經科學

Adora2a/Adenosine Receptor A2a (E5I8X) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific)

94871

IHC-P、IF-F

M、R

GFAP (E4L7M) XP® Rabbit mAb

80788

WB、IHC-P、IF-F

H、M、R

Myelin Basic Protein (D8X4Q) XP® Rabbit mAb

78896

WB、IHC-P、IF-F、IF-IC

H、M、R

NCAM1 (CD56) (E7X9M) XP® Rabbit mAb

99746

WB、IP、IHC-P、IF-F、 IF-IC、F

H、M、R

NeuN (D4G4O) XP® Rabbit mAb

24307

WB、IHC-P、IF-F

H、M、R

Tau (D1M9X) XP® Rabbit mAb

46687

WB、IHC-P、IF-F、IF-IC

H、M、R

免疫學

Btk (D3H5) Rabbit mAb

8547

WB、IP、IHC-P、F

H、M、(R、Hm、B、Dg、Pg、Hr)

CD3ε (D4V8L) Rabbit mAb

99940

WB、IHC-P

M

CD4 (D7D2Z) Rabbit mAb

25229

WB、IHC-P

M、R

CD8α (D4W2Z) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

98941

WB、IHC-P

M

CD11c (D1V9Y) Rabbit mAb

97585

WB、IHC-P、IF-F、IF-IC

M

CD19 (D4V4B) XP® Rabbit mAb

90176

WB、IP、IHC-P

H、M、(B)

CD31 (PECAM-1) (D8V9E) XP® Rabbit mAb

77699

WB、IHC-P

M

CD39/NTPDase 1 (E2X6B) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

14481

WB、IHC-P

M

CD40 (E2Z7J) Rabbit mAb

86165

WB、IP、IHC-P

M

CD45 (D3F8Q) Rabbit mAb

70257

P、IHC-P、IF-F、IF-IC

M

F4/80 (D2S9R) XP® Rabbit mAb

70076

WB、IP、IHC-P

M

Granzyme B (E5V2L) Rabbit mAb (Mouse Specific)

44153

WB、IP、IHC-P、F

M

FoxP3 (D6O8R) Rabbit mAb

12653

IHC-P、IF-F、F

M

FcγRIIB (D8F9C) XP® Rabbit mAb(Mouse Specific)

96397

WB、IP、IHC-P、F

M

NT5E/CD73 (D7F9A) Rabbit mAb

13160

WB、IHC-P

H、M、R

PD-1 (D7D5W) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

84651

WB、IP、IHC-P、IF-F、IF-IC、F

M、(R、Hm)

PD-L1 (D5V3B) Rabbit mAb (Mouse Specific; IHC Specific)

64988

IHC-P

M

PD-L2 (D6L5A) Rabbit mAb

49189

IHC-P

M

S100A9 (D3U8M) Rabbit mAb (Rodent Specific)

73425

WB、IP、IHC-P、 IF-F、F

M、R

STING (D2P2F) Rabbit mAb

13647

WB、IP、IHC-P

H、M

TIM-3 (D3M9R) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

83882

WB、IP、IHC-P

M

VCAM-1 (D2T4N) Rabbit mAb (Mouse Specific)

32653

WB、IHC-P

M

 

請訪問 cst-science.com/mouse-IHC,了解詳細的實驗步驟,包括特定產品的 Leica® BOND™ 實驗步驟。

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